RNA琼脂糖凝胶电泳时为什么点样孔很亮，而且没有规律，时有时无，每次都是新胶及新的缓冲液？请各位帮忙

答案:3 悬赏:20 手机版

解决时间 2021-03-17 10:37

提问者网友：半生酒醒
2021-03-16 15:16

Marker很正常，目前还没有出现这种情况

最佳答案

五星知识达人网友：患得患失的劫
2021-03-16 16:14

这是因为你RNA中含有蛋白或者多糖的污染，这些大分子物质影响了RNA的出孔，使很多RNA停留在孔中或者出孔很慢。这样你染色后就看到孔以及接近孔的位置很量。你最好上样前用分光光度计测下RNA的纯度，A260/280和A260/230，这两个值应该都在2.0左右才是纯度高的RNA。第一个值过低是蛋白污染，第二个值过低是多糖污染。

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1楼网友：逃夭
2021-03-16 18:41

不知道你的RNA样品纯不纯，是否含有DNA，蛋白质和多糖较多；还有就是点样的时候枪头不要戳进胶内。我曾这样做过，没问题（仅供参考）：①电泳RNA 所用器械如制胶的模具、梳子、电泳槽等用肥皂粉洗干净后用双蒸水冲洗二遍后在室温晾干备用。②用新的1XTBE 配制1. 2 %琼脂糖凝胶,倒胶时溴化乙锭(E直接加入凝胶中。③制备好的琼脂糖凝胶板放入电泳槽后再加入经高压灭菌过的1XTBE ,液面只能刚好同胶面平齐,缓冲液不要淹过胶面。④点样时,样品RNA 每10μl 加入2μl 上样缓冲液,上样缓冲液是用DEPC 处理的水配制的50 %甘油,另外单独点一样品孔含有3μl 溴酚蓝的上样缓冲液作为电泳指示剂,电泳电压4 V/ cm ,电泳时间2 h 左右便可取出凝胶在紫外灯下观看所提取的RNA 的质量或进行拍照记录。

2楼网友：北方的南先生
2021-03-16 17:26

rna跟dna不一样，主要现象就是降解 1.提取过程中rna出现降解 2.洗脱的时候洗掉了 3.18s有部分降解 4.弥散带说明降解严重，杂质过多 5.28s部分降解 rna完美提出来的话应该是三条带：28，18, 5.8 28和18比较亮而且28是18的2倍量 5.8基本很模糊可有可无

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