)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点，

)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点，

如果只使用单酶切的话，可选择的酶有SmaI酶，酶切后任何酶切产物连到质粒中均有可能是正向和反向2种情况，因此会有2种重组质粒。因为将氯霉素抗性基因切断了，所以需要新霉素抗性培养基筛选。使用kpnI和smaI双酶切连接后只有1种重组质粒了，有新霉素抗性。
x酶处理后可以酶切的有kpnI，MspI，质粒中有1个kpnI位点，2个MspI位点，1个SmaI位点，而smaI位点可以被MspI切开，所以共有4个酶切位点，得到4个片段。