定点突变的流程

定点突变的流程

定点突变一般须有含有待突变基因的高纯度质粒，不少于10μg，电泳图清晰，达酶切及测序要求；
1.对待突变基因测序结果进行分析，设计突变方案；
2.根据突变方案设计合成覆盖突变位点的双向引物，合成目的DNA两端引物，进行高保真PCR反应；
3.默认情况下，将PCR产物克隆至T载，或者根据要求亚克隆至目的载体；DNA测序验证突变序列的正确性。