做RT-PCR内参的作用是什么？应该如何选择管家基因啊?

做RT-PCR内参的作用是什么？应该如何选择管家基因啊?

内参的选择：普通PCR内参的大小没有多大要求，但real time一般选择300bp以下 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时，加入的浓度可能会不一致，即使用分光广度计测其浓度，也会有仪器误差.PCR时，每个标本都要做对应的内参，而且每次都要做，跑出的条带进行灰度分析，用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量. 你可以去生物帮那里了解。那里面向生物研究者、企业和研究机构，提供最新、领先、精准、高效、全面的生物产品和技术信息。 1. 物种：拟南芥(arabidopsis)或maize 2. 基因名称：18S rRNA 3. 模板：cDNA 4. PCR类型及目的：RT-PCR 5. Forward primer (5’-3’): CCATAAACGATGCCGGA Reverse primer (5’-3’): CACCACCCATAGAATCAAGA Probe: 无 6. 产物长度(bp)：350 7. 引物浓度：50 pmol/ul 8. 退火温度：54.1 9. 所用仪器：PE-9600 10. 提交者ID：yuxing955 11. 参考文献原文：本人亲自验证，还有本实验室其他人亲自验证。 可以参考： please click to connect www.bio1000.com/zt/dna/225764.html .hope that i can help you 1. 物种： maize 2. 基因名称：actin 3. 模板：cDNA 4. PCR类型及目的：RT-PCR 5. Forward primer (5’-3’): AAATGACGCAGATTATGTTTGA Reverse primer (5’-3’): GCTCGTAGTGAGGGAGTACC Probe: 无 6. 产物长度(bp)： 7. 引物浓度：50 pmol/ul 8. 退火温度：54.1 9. 所用仪器：PE-9600 10. 提交者ID：yuxing955 11. 参考文献原文：本人亲自验证，还有本实验室其他人亲自验证 你可以去生物帮自己查找一下啊，应该有帮助。

记得采纳啊

你说的应该是real time pcr吧，注意rt其实是逆转录reverse transcription的缩写，和real time一定要分开来。 常说的qpcr，qrt-pcr，都是通过实时（real time）的方法，测定样品中某个模版的起始量ct值 但是呢，由于之前rna提取、反转等步骤，各个步骤存在不同的效率，ct值并无法真实反应样品中模版的绝对量，因此，需要一个内参来做为参考。 比方说，a基因的ct值，在a样品中是18，在b样品中是20，由于a b样品存在rna质量等等一系列不同，你无法直接就判断这个基因在a样品中的表达量是b样品的4倍。 这时候，我们需要一个内参，假如内参ct值在a样品中是14，而在b样品中是15。由于内参的稳定性，在不同样品中被认为是表达量一致的，因此，a基因的在ab样品之间的-δδct值是1，也就是表达量为2倍的关系。 这里，我们可以知道内参的作用，即通过测量内参，可以在后面分析过程中将不同样品的起始量均一化。内参需要选择在不同样品中有稳定表达量的基因，这就是为什么内参经常选择看家基因的原因。以小鼠为例，常用的内参有actin gapdh hprt等等。 当然，现在的很多观点认为这些基因在不同组织中丰度也不同，例如gapdh，在线粒体含量高的组织中丰度高，很多人认为用基因组dna做内参会更加靠谱，当然这是后话了，选择gapdh无碍于现阶段的实验，如果觉得不靠谱，可以选择两个内参。 你所研究的物种，应该有人已经发表过相应的内参，直接上数据库搜就可以了。 原创内容，码字不易，万望采纳。