下面是某同学做自生固氮菌分离实验的方案和观察结果：NaNO3:2gK2HPO4: 1gKCl: 0.5gMgSO4: 0.5gFeSO4:0.01g蔗糖：30g琼脂：15~20g蒸

下面是某同学做自生固氮菌分离实验的方案和观察结果：
NaNO3:2g
K2HPO4: 1g
KCl: 0.5g
MgSO4: 0.5g
FeSO4:0.01g
蔗糖：30g
琼脂：15~20g
蒸馏水：1 000 mL
一、实验目的（略）
二、实验材料和用具（略）
三、实验方法和步骤
1.接种
（1）接种前，准备好盛有配方如上表的培养基，放入培养皿中并灭菌，供实验用。
（2）取10 g土壤，放在无菌研钵中，注入5 mL蒸馏水，并用无菌玻璃棒搅拌均匀，备用。
（3）将接种环放在酒精灯的火焰上灭菌。将培养皿盖轻轻放在桌面上，手拿培养皿。将接种环放在培养基边缘处冷却。然后，用接种环蘸取少许泥浆，轻轻地点接在培养基的表面上，共点接15~20处。
（4）接种后，轻轻地盖上培养皿盖，将培养皿放在实验桌上。
2.培养
将接种过的培养皿放入恒温箱内，在室温下培养3~4 d。
3.观察
3~4 d后，取出培养皿，仔细观察培养基上的菌落，其中大而扁平、边缘呈波状或锯齿状并为褐色菌落的为自生固氮菌。
4.镜检（略）
该实验方案和观察结果中有几处明显错误，请指出并改正。①培养基的配方中含有氮源是错误的，应将NaNO3改为不含氮的钠盐。
②实验步骤接种（2）中用蒸馏水是错误的，应改为无菌水。
③实验步骤（3）中将培养皿盖放在桌面上是错误的，应改为略微打开培养皿盖。
④实验步骤接种（4）中没有写实验内容、接种人的姓名和日期，应加上这些内容。 ⑤实验步骤培养中，应将“在室温下培养3~4 d”改为“在28~30 ℃的温度下培养3~4 d”。⑥实验步骤观察中“仔细观察培养基上的菌落，其中大而扁平、边缘呈波状或锯齿状并为褐色菌落”是错误的。应改为“仔细观察培养基上稀泥浆周围出现的黏液。黏液初为无色透明，后为乳白色，最后变为褐色”。

(答案→)①培养基的配方中含有氮源是错误的，应将NaNO3改为不含氮的钠盐。②实验步骤接种（2）中用蒸馏水是错误的，应改为无菌水。③实验步骤（3）中将培养皿盖放在桌面上是错误的，应改为略微打开培养皿盖。④实验步骤接种（4）中没有写实验内容、接种人的姓名和日期，应加上这些内容。 ⑤实验步骤培养中，应将“在室温下培养3~4 d”改为“在28~30 ℃的温度下培养3~4 d”。⑥实验步骤观察中“仔细观察培养基上的菌落，其中大而扁平、边缘呈波状或锯齿状并为褐色菌落”是错误的。应改为“仔细观察培养基上稀泥浆周围出现的黏液。黏液初为无色透明，后为乳白色，最后变为褐色”。 解析：考查对自生固氮菌分离实验的掌握：（1）自生固氮菌分离实验的原理是：将用表土制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能正常生长繁殖。（2）分离自生固氮菌的步骤：①接种：取灭菌的无氮培养基，在无菌研钵中用无菌水（而不是蒸馏水）制备稀泥浆，接种时培养皿盖应略微打开以防空气中杂菌进入，接种后盖上培养皿盖，并在盖上写明实验内容、接种人的姓名和日期。②培养：将培养皿移入恒温箱内，28~30 ℃的温度下培养3~4天。③观察：观察培养基上稀泥浆周围出现的培养物——黏液，黏液初为无色透明，后为乳白色，最后变为褐色，表明含有自生固氮菌。根据题干内容和以上步骤、原理进行对比，即可找出其中错误之处。

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