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菌种保藏及活化的问题

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解决时间 2021-03-09 12:20
菌种保藏及活化的问题
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多低温?多长时间?4°C的话时间最多最多不要超过1周,零下保存的话记得加甘油,时间可以长一点。其实我建议是零下保存,然后用的时候重新划线挑菌再摇就好了。总之如果不马上用的话,无论怎么保存,再次用之前最好还是划个线,挑菌摇一晚再用比较好。
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如果是基因工程菌,要考虑质粒丢失的可能性
一、安瓿瓶装微生物菌种开封1-1、用浸过70%酒精的脱脂棉擦净安瓿瓶。1-2、用火焰将安瓿瓶口加热灭菌。 1-3、用镊子将铝封口撕开。二、菌株恢复培养2-1、用无菌吸管,吸取0.3-0.4ml适宜的液体培养基,滴入安瓿管内,轻轻振荡,使冻干菌体溶解呈悬浮状。2-2、取约0.2ml菌体悬浮液,移植于指定的琼脂斜面培养基上,剩余的菌液,注入指定的液体培养基内(3-4ml),然后在建议的温度下培养。三、注意事项3-1、菌种活化前,请将安瓿瓶保存在5-10℃的环境下。3-2、厌氧菌的培养,如无特别说明,自开封至接种完成,均需以无氧气体充填,以保持厌氧状态。3-3、某些菌种经过冷冻干燥保存后,延迟期较长,需连续两次继代培养才能正常生长。四、制作em菌液4-1、菌种活化:用em菌种10克、红糖0.1公斤(红糖先用热水溶化),加入1公斤的水。注:(先把水加热到100°c后加入红塘或白糖,而后继续加热5分钟。冷却到40°c时加入em菌种),密闭发酵(35°c-40°c温度)下活化3天,打开容器口闻到有酸甜味即活化成功。可以作为液体菌种使用。4-2、制作原液:将活化好的液体菌种加入二级发酵罐。菌种——二级发酵罐(密闭) (加水比例:按1:10的比例加入) 二级发酵液:(10%的无菌糖水! 0.1%琼脂粉!温度35-40度!发酵5-7天!)成品发酵液标准(气味:酸甜! ph值:4.0-5.0! 活菌含量:100亿/ml !)
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