质粒提取浓度太低是什么原因

质粒提取浓度太低是什么原因

Axugen的试剂盒已经很不错了,要是提不出浓度很高的质粒,可以试试下面的一些方法：
1、增加收菌次数,相对提高了质粒的量,这样的话裂解液的量可以适当增加；
2、裂解要充分,变性和复性按说明应该是不超过5分钟,合理控制时间,一般在3分到4分半的时间都是可以的；
3、过柱子时,吸附的时间尽量长一些,可以在这期间做做其他实验或者吃个饭什么的；
4、如果没有必要,不使用去蛋白液,因为每过一遍柱子,其损耗越大,不过这得根据说明的菌种而定；
4、最后洗脱回收的时候,要单方面提高浓度,就要适当减少洗脱液的量,我一般都是回收到40~50 μL的,同时要增加洗脱次数,一般两三次足矣.
如果以上方法都用遍了还无效,就应该考虑菌种本身的问题,是不是冻融或者传代次数过高,导致质粒本身丢失?质粒本身在大肠杆菌的拷贝数是多少?不行的话建议重新将质粒导入到大肠杆菌感受态细胞中.